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Cell Release Factor Assay

ACROBiosystems百普赛斯基于流式细胞术Multiplex Bead Assay平台,自主研发出细胞因子检测试剂,经严格方法学验证,可实现运用流式细胞术进行单一或多种因子同时准确定量,旨在临床前、临床以及生产质控环节等提供全面的解决方案,为药物开发提供高效率,低成本的简便工具。

基于流式细胞术的Multiplex Bead Assay原理:

1. 使用不同荧光强度和大小的微球,每种微球标记有特定抗体,用于捕获目标蛋白。将样本与标记微球混合,目标蛋白与微球上的抗体结合。

2. 加入荧光标记的检测抗体,与目标蛋白结合,形成“微球-捕获抗体-目标蛋白-检测抗体“复合物。

3. 通过流式细胞仪检测微球和检测抗体的荧光信号,微球荧光区分不同目标蛋白,根据荧光强度建立标准曲线进行蛋白浓度定量。

基于流式细胞术的Multiplex Bead Assay原理

原理示意图

基于流式细胞术Multiplex Bead Assay的产品优势

产品优势

标准品经过与NIBSO/WHO国际标准校正;

样本少 - 检测样本用量低,仅需10-30uL样本;

时间短 - 检测时间短,一次实验即可测出多种细胞因子含量,支持一个工作日内重复;

步骤少 - 使用磁吸附,简单易行,减少离心操作,避免磁珠丢失;

检测范围宽 - 横跨4个数量级;

兼容强 - 对流式细胞仪适应性强,可与不同商家品牌流式细胞仪和多种分析软件配套使用。

通过使用标准蛋白信噪比筛选自研抗体对以满足试剂盒性能,在获得检测灵敏度符合要求抗体后,对细胞上清、血清、血浆等样本检测确定抗体对真实样本特异性识别;

抗体对选择

主要采用磁性微球作为分群载体,利用化学反应实现抗体与磁性微球共价键偶联,偶联后通过与标准批次比对确认抗体偶联量及批次一致性;

捕获磁珠

通过PE直接标记,降低生物素与亲和素反应可能带来的非特异信号;

检测抗体

采用磷酸盐缓冲体系,通过调节detergent浓度调节满足试剂盒样本中常见干扰物质如EDTA、血红蛋白等对检测干扰性。为降低试剂毒性采用proclin代替叠氮钠作为抗菌剂。

缓冲体系

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FAQ

Q: 经过多步磁性分离后,磁珠沉淀越来越少怎么办?

A: 每次清洗时要缓慢小心地抽取上清液;在吸附时,增长孔板在磁力架上的磁吸时间,肉眼可见磁珠明显堆积在底部。

Q: 只提供一个板子,进行完一次实验后,其他孔还可以进行实验吗?

A: 建议用锡箔纸、封口膜等盖上未实验孔,避免灰尘等污染。

Q: 数据采集时,FSC-SSC散点图中观察到大量的碎片怎么办?

A: 适当增加FSC和SSC的阈值。

Q: 流式细胞仪检测范围宽,不需要调电压,每次需要上样PE和APC 补偿吗?

A: 要,上样PE和APC 补偿微球主要是为了获取合适的荧光信号,保证分群明显。

Q: 如何处理数据?

A: FlowJo可以FCAP,或用FCS导出,使用Graphpad处理数据。

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