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生物素标记蛋白

生物素与亲和素/链霉亲和素的结合具有高度特异性和稳定性，两者的亲和常数比抗原-抗体反应高10-100万倍，这使得它成为蛋白质生物化学中的一个非常好的工具。然而，高质量的生物素标记蛋白的生产目前是一个重大的挑战。研究人员经常遇到的技术问题，包括不能充分标记，高批次间差异，和不可预知的性能表现。此外，生物素标记方法的选择也会显著影响最终的结果。每一个目标蛋白都有着自己独特的生化特性，因此需要定制化的解决方案。

这些复杂的因素使得个人实验室很难制造和使用生物素结合物，同时，很少有商业化的产品可供购买。为了填补这一空白，ACROBiosystems公司开发出了一系列独家的预先标记且经实验验证的生物素标记重组蛋白。MABSOL®生物素标记蛋白包含超过上百种常用的药物靶点和生物标志物蛋白。我们以高质量的人源细胞表达的蛋白为原料，每一步都经过充分考量，以达到较高的生物活性和检测灵敏度。我们还使用严格的质量控制，以确保较小的批次间差异。

MABSOL®生物素标记蛋白系列包括两个独特的互补产品系列，分别是建立在Avitag™技术上的PrecisionAvi系列（查看产品列表），和使用内部开发的化学标记法的UltraLys系列（查看产品列表）。具有严格的细节要求和质量检测标准

PrecisionAvi系列

使用Avitag™单点酶标标记技术的生物素标记蛋白

本系列产品是使用Avitag™技术专门生产的。简而言之，一条独特并有15个氨基酸的多肽和Avi标签被引入在进行表达载体构建的重组蛋白上。在Avi标签中的单一的赖氨酸残基被大肠杆菌生物素连接酶生物素化。

  • 生物素化发生在Avi标记的赖氨酸残基上，标记均一
  • 不影响蛋白的天然活性
  • 固定在亲和素包被表面的蛋白具有方向一致性

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热门产品列表

4-1BB BAFF BCMA CD155 CD19 CD3E & CD3D CD96 CTLA-4 IL-2 PD-1 PD-L1 S protein Siglec-15 TNF-α VEGF165

UltraLys系列

使用独特超高灵敏度的化学标记法标记的生物素标记蛋白

UltraLys系列由优化设计的化学标记法生产。蛋白质N端的游离胺基及内部的赖氨酸侧链上的胺基都能与生物素分子结合，通常一个蛋白质分子会被标记上多个生物素分子。

  • 较高的检测灵敏度
  • 标记方法简单

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产品列表


B7-H4 CD19 CD3E & CD3D CX3CL1 EpCAM EphB4 FcRn (FCGRT & B2M) GM-CSF GPA33 Growth Hormone R Her2 IL-6 Mesothelin TFPI TNF-alpha Transferrin R VEGF165

产品应用


产品特征

高生物活性和检测灵敏度

生物素标记蛋白的生物活性由蛋白自身结构和生物素标记方式决定。我们测试了多种标签和生物素标记方法，用多种结合实验进行产品评估，选择表现最好的蛋白进行生产。图1为内部评估实验举例。

mabsol-img.jpg
图 1.功能性ELISA检测不同形式的生物素标记的PD1和rhPD-L1（Cat. No.PD1-H5258）的结合能力。

我们的生物素标记蛋白在不同的应用中均具有高生物活性和极好的检测灵敏度。图2功能性ELISA实验中，生物素标记的人TACI蛋白与BAFF有较高的结合活性。图3是定向固定和随机固定两种ELISA方法的比较，结果显示通过链霉亲和素定向固定的生物素标记的CD155比随机固定的非生物素标记CD155具有更高的检测灵敏度。图4和图5实验结果表明生物素标记的PD1可以很好地应用于AlphaLISA检测其与配体PD-L1及PD-L2的结合活性。图6和图7 SPR实验中可以看出，生物素标记蛋白可以很好的用于检测蛋白与治疗性抗体的亲和力。此外，生物素标记蛋白也经常用于细胞实验中，如细胞毒性实验及CAR表达阳性率检测实验（如图8和图9所示）。

ELISA
图2. ELISA 检测生物素标记的Human TAIC (Cat. No. TAI-H82F6) 与 BAFF (Cat. No. BAF-H5261)的结合活性，线性区间为0.002-0.05 μg/mL.
图3. 定向固定和随机固定的比较实验结果显示，通过预先包被在96孔板上的链霉亲和素固定的生物素标记CD155（Cat. No. CD5-H82E3）和直接包被在96孔板上的非生物素标记的CD155（Cat. No. CD5-H5223）相比，前者结合TIGIT（ Cat. No. TIT-H5254）的活性更高。
AlphaLISA
图 4. AlphaLisa检测生物素标记的Human PD-1（Cat. No. PD1-H82F1）与PDL1 (Cat. No. PD1-H5229) 的结合活性，线性区间为0.02-0.625 μg/mL。
图 5. AlphaLISA检测生物素标记的Human PD-1（Cat. No. PD1-H82F1）与PDL2 (Cat. No. PD2-H5220) 的结合活性，线性区间为0.02-0.625 μg/mL。
SPR
图 6. 在SPR实验中，将生物素标记的human VEGF165 (Cat. No. VE5-H82Q0)通过链霉亲和素固定在CM5芯片上，其与Avastin结合的亲和常数是0.417nM（Biacore T200）。
BLI
图7. 在BLI实验中，将生物素标记的 PD-1 (Cat. No. PD1-H82E4) 固定在SA传感器上，可以结合Human PD-L2，亲和常数为2.4 μM (ForteBio Octet Red96e)
Cell based assay
图 8. 重组human TNF-alpha介导的对WEH1-13VAR细胞的细胞毒性实验，EC50为0.014-0.029 ng/ml。结果显示生物素标记的human TNF-alpha与非生物素标记的TNF-alpha表现一致。

高批间一致

我们通过严格的质量控制确保产品的批间一致性。每一个产品不同批次会通过多种实验方法以我们内部标准进行并行对比，只有差异在可接受范围内的产品才会被放行。就像图9. ELISA分析对比三个不同批次生物素标记的Human TNF-alpha（Cat. No. TNA-H82E3）和Adalimumab的结合，结果显示这些样品批次间差异可忽略。在细胞水平的实验中，产品同样具有很好的批间一致性（如图10所示）。

图 9. 在上述ELISA 实验中, 检测3个不同批次的生物素标记的human TNF-alpha (Cat. No. TNA-H82E3)与Adalimumab 的结合，结果显示被检样品的批间差异性很小。
图 10. 用代谢抑制剂放线菌素D及重组生物素标记的human TNF-alpha (Cat. No. TNA-H82E3) 介导的对WEH1-13VAR细胞的细胞毒性实验（EC50为0.029-0.052 ng/ml），两批TNF-alpha表现一致。

部分引用文献


Integration of a CD19 CAR into the TCR Alpha Chain Locus Streamlines Production of Allogeneic Gene-Edited CAR T Cells


Authors: MacLeod DT et al.

Journal: Mol Ther 2017

Product: biotinylated Human CD19（Cat. # CD9-H8259）

Application: Flow Cytometry

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Quantification of active infliximab in human serum with liquid chromatography-tandem mass spectrometry using a tumor necrosis factor alpha -based pre-analytical sample purification and a stable isotopic labeled infliximab bio-similar as internal standard: A target-based, sensitive and cost-effective method

Authors: El Amrani M et al.

Journal: J Chromatogr A 2016

Product: biotinylated human recombinant TNF-alpha（Cat. # TNA-H8211）

Application: ELISA

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ANTIBODY-DRUG CONJUGATE HAVING IMPROVED STABILITY AND USE THEREOF

Authors: Kim Young Min et al.

Journal: United States Patent Application 20160136300 2016

Product: ErbB2（Cat. # HE2-H822R）

Application: ELISA

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Microsphere-based immunoassay integrated with a microfluidic network to perform logic operations

Authors: Pooja Sabhachandani et al.

Journal: Microchimica Acta 2015

Product: biotinylated human TNF-α（Cat. # TNA-H8211）

Application: Microsphere-based assay

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NOVEL CELL LINE SCREENING METHOD

Authors: YU et al.

Journal: United States Patent Application 20140155285 2014

Product: biotinylated TNFα（Cat. # TNA-H8211）

Application: Flow Cytometry

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  • 背景
  • PrecisionAvi系列
  • UltraLys系列
  • 产品应用
  • 产品特征
  • 部分引用文献